、目的要求
1．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
2．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理
高压蒸汽灭菌是将灭菌过的物品放置在封闭的高压蒸汽灭菌锅中，通过加热，使灭菌锅在锅之间沸腾产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀继续加热，这时因为蒸汽不能溢出，并且增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，获得高于100℃的温度。导致细菌蛋白凝固变性，达到灭菌的目的。
在使用上海申安高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
实验室中常用的高压蒸汽灭菌锅有立式、卧式和手提式等几种，本实验介绍手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
三、器材
牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（6套包），手提式高压蒸汽菌锅等。
四、操作步骤
1．先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧致，勿使漏气。
4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 1．05kg/cm2 ，121．3℃，20分钟灭菌。
5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让上海申安灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。
6．将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。
五、实验报告
1．结果
检查培养基灭菌是否彻底。
2．思考题
（1）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀，开盖取物？
（2）在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，怎样杜绝切不安全的因素？
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